据后人考证，蒙娜丽莎的原型那波里芙，1479年生于一个富足的贵族之家。
历时四个春秋，达 ·芬奇终于完成了这幅肖像画。在衣饰描写上，达 ·芬奇取消了一切华丽的装饰，不过对胸襟和衣袖的褶襞却情有独钟，做了精细的描写。另外，当时的女子好广额，往往将眉刮去，并引为社会风尚，所以，达 ·芬奇作画时就没有给蒙娜丽莎画眉毛，这使画中人物增添了一种大理石雕塑的意味。
在处理蒙娜丽莎的脸部、胸部和手部时，达 ·芬奇使用了其特有的“明暗转移法”。他用他喜欢的微暗的光，使蒙娜丽莎脸上和手上都仿佛罩上一层黄昏时的光影，明暗相得益彰，使画面既柔和又富有诗意。背景方面，我们可以看到隐约的圆柱基础和石栏。它们将画面的近景和远景区分开来。
在达 ·芬奇看来，最神圣的莫过于人，人体是自然界中最美的形象。他曾屡次对人体加以测量，证明人体各部分间的比例都是整数比，因而人体呈现的美，最为和谐。他将其称为“神圣的比例”。蒙娜丽莎的右手被誉为世界美术史上最美的一只手。现代摄影技术已经非常进步，但拿现代摄影作品中的手与之相比，人们仍会认为这只手更具质感，更有分量，更富生命力。
蒙娜丽莎的微笑透着一种神秘莫测的千古奇韵，耐人琢磨。在蒙娜丽莎的身上，理性的原则与高度的诗意，崇高的精神与灵动的肉体，情感与理智，科学与艺术，都达到了和谐而完美的统一。可以说，这幅作品既反映了文艺复兴时期的伟大思想内涵，又体现了达 ·芬奇惊人的艺术造诣。因此，几个世纪以来，人们对它的热情依然不减。